纤维蛋白是不溶于水的蛋白质，纤维蛋白原在凝血酶的作用下，切去纤维肽A和B，转变为纤维蛋白并产生凝集，这一过程会导致反应体系的光散射强度发生变化。光散射法是依据光散射强度发生变化建立的。
原理：用纤维蛋白原作底物，加入一定量的凝血酶，检测在480nm处光散射强度的变化，在一定浓度的纤维蛋白原溶液中，光散射强度的变化速度与加入的凝血酶的量成正比，在一定的纤维蛋白原和凝血酶的浓度下，加入水蛭素，会降低光散射强度的增加速度，且加入量与光散射强度变化成反比。
光散射法的主要方法是先建立水蛭素标准曲线，即把含有血纤维蛋白原（终浓度1.2μmol－1·L－1）和标准水蛭素（终浓度0~23μmol·L－1）0.05mol·L－1Tris－HCl（pH7.2）NaCl缓冲液2mL，在25℃下保温8分钟，然后再加入凝血酶，立即在25℃测定光散射10分钟。根据最大斜率处每分钟光散射强度变化值作为活性计算依据。用最大斜率处每分钟光散射强度变化值，对水蛭素浓度做一元线性回归图，得到水蛭素标准曲线。用待测水蛭素代替以上的标准水蛭素，在480nm处测光散射值，查标准曲线，即可得到相应的抗凝活性值。该方法的相关系数为0.994。
该方法的优点是提高了准确性、操作简便，同时可以观察反应动力学曲线。但光散射仪价格较贵，不具有普遍适用性，目前较少应用。
