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水蛭素生物活性测定法之纤维蛋白原平板法

纤维蛋白原平板法将单向扩散与生物活性测定方法有机结合,单向扩散是利用琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应。琼脂凝胶是多孔的网状结构,大分子物质可以自由通过,这种分子的扩散作用使底物和酶结合,形成酶-底物的复合物,当复合物的比例合适时出现沉淀。

该方法是以纤维蛋白原作为底物,把标准凝血酶以及经水蛭素抑制后的凝血酶滴加到平板的加样孔里,在纤维蛋白原平板上进行扩散反应,精确测量沉淀圈直径,以扩散沉淀圈直径为纵坐标,标准凝血酶活力为横坐标,绘制标准凝血酶活力标准曲线,r=0.9959。根据相关系数可以看出沉淀圈直径与凝血酶活性在一定范围内具有良好的线性相关性。在标准曲线上查出凝血酶与水蛭素反应后的剩余凝血酶活力,计算出水蛭素的活性。

该方法的试验成本低,操作简便,准确度较好,灵敏度达±0.3AT-U·mL-1。但是耗时长,扩散反应需要8小时,不能满足快速测定需求。

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