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水蛭素生物活性测定法之蝰蛇毒凝血时间测定法

蝰蛇毒凝血时间测定法(Ecarin Clotting Time,即ECT法)

ECarin是自Ehis Carrinatus蛇毒中提取纯化的一种酶,它通过启动凝血第x因子,与磷脂、凝血因子V、钙离子结合形成凝血酶原激酶,使凝血酶原转变为中间凝血酶,中间凝血酶具有水解蛋白活性,可启动纤维蛋白酶原把纤维蛋白原变为纤维蛋白。水蛭素能与中间凝血酶结合,抑制其活性,从而引起蝰蛇毒凝血时间延长。蝰蛇毒凝血时间延长与水蛭素呈线性相关,其范围0.0~2.0 μg·L-1之间。

此法简单、快速,不受肝素干扰,但是也有研究表示本法不够精确,尤其是在测定血浆中的重组水蛙素时受凝血酶原影响大,所测值常高于实际值,只有当凝血酶原的合量大于血液中含量50%时,该法才有显著的可靠性。

凝血酶滴定法简单经济,广泛应用。但是准确度和重复性不够理想,而且测定结果受凝血酶浓度和纤维蛋白原浓度影响大。生色底物法适用浓度范围广,结果准确,重复性好,适合体内和体外检测,但是生色底物需要进口,价格昂贵,从而限制了此种方法的广泛应用。光散射法的优点是提高了准确性、操作简便,同时可以观察反应动力学曲线,但光散射仪价格较贵,不具有普遍适用性,目前较少应用。纤维蛋白原平板法的试验成本低,操作简便,准确度较好,灵敏度达±0.3AT-U·mL-1,但耗时长,扩散需要8小时,不能满足快速测定需求。抗凝法灵敏度差,线性范围窄,且误差较大,不适合临床和实验室监测。ECT延长与水蛙素呈线性相关,此法简单、快速,不受肝素干扰,但是研究表示ECT法不够准确,所测值常高于实际值。

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