中国水蛭素
学习研究第一平台

传统提取天然水蛭素方法

天然水蛭素传统提取法,又称一次性提取法。

天然水蛭素传统提取法是对水蛭的一次性掠夺,因为其所用的原材料是已处死的吸血类水蛭鲜品或其干燥品,为一次性提取,吸血类水蛭无法再生。这种方法其工艺复杂,提取率较低,生产成本过高,因此,一直以来天然水蛭素都无法进行规模化生产。

天然水蛭素传统提取法工艺流程:吸血类水蛭鲜品或其干燥品→匀浆或粉碎→加入适量干净水浸提1一3小时→离心、去渣,取上清液→除去杂蛋白(如酸沉),离心、去渣,取上清液→调PH至近中性→脱盐、浓缩→高效液相色谱(HPLC)法或反相高效液相色谱(RP一HPLC)法提取→加入适当的辅料→干燥→天然水蛭素纯品。

1.黄爱民等:以广西菲牛蛭消化液为原料,采用三氯醋酸沉淀、离子交换、凝胶过滤和高效液相色谱法分离纯化抗凝物质,用SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳测定其蛋白质的相对分子质量(Mr),用等电聚焦法测定蛋白质的等电点。

结果:从广西菲牛蛭中分离出2种抗凝物质―菲牛蛭素A(BDA)和菲牛蛭素B(BDB),BDA Mr约为15200道尔顿,等电点为3.97;BDB Mr约为14600道尔顿,等电点为4.61。从菲牛蛭消化液中可分离出BDA的收率约为0.303%,比活为2777.8ATU/mg,活性收率约为27.8%;BDB的收率约为0.300%,比活为2845.5AT一U/mg,活性收率约为28.4%。

结论:广西菲牛蛭消化液中分离出的BDA、BDB对凝血酶具有极强的抑制作用,具有广阔的运用前景。

讨论:有研究表明,从欧洲医蛭和日本医蛭中提取到的单一抗凝物质,其Mr在7000-8000道尔顿,等电点为3.9左右;而从马尼拉菲牛蛭中则提取到2种抗凝成分(p6,p18),Mr约为7000道尔顿,等电点未见报道。本试验从广西菲牛蛭消化液中分离提取到的抗凝物质BDA和BDB,其等电点分别为3.97和4.61,Mr在15000道尔顿左右,这可能是两条肤链重叠的缘故。

2.刘洋等以新鲜日本医蛭头部、口器及身体其他部位为原料,分别对其绞碎制得相应的三种浆液,然后每种浆液均按下列步骤进行提取:按浆液:浓盐酸:丙酮=100:2.5:550的配比提取。48小时后滤取丙酮,残渣再用2.5倍丙酮浸提24小时,过滤,合并丙酮提取液。残渣再用适量的丙酮洗1次合并,加热到80℃一85℃,去除杂蛋白,浓缩回收丙酮,得浓缩物,过滤得水蛭素粗品;然后将这些水蛭素粗品装到DEAE-SephadexA一50(1.6cmx40.ocm)上用0.lmol/Lnacl一0.001mol/Ltirs一Cl PH8.0线性梯度洗脱,收集活性组合,再重复上述步骤,然后再冷干浓缩。接着进行阴离子交换层析、凝血酶亲和层析,收集活性组分,冷干浓缩得到水蛭素纯品。

从日本医蛭头部、口器及身体其他部位所得到的水蛭素纯品分别是水蛭素1(HV1)、水蛭素2(HV2)和水蛭素3(HV3)。
结果:从三个不同部位提取到的纯品,分子量在6900~7100道尔顿,其抗凝性测定结果,详见表2-4。

表2-4不同提取部位的抗凝活性测定结果表

讨论:从上述结果可以看出水蛭素是一种低分子多肤,即它的分子量很小,单位重量所含有的抗凝活性很高。三种水蛭素的抗凝活性测定表明,日HV2的活性最强,故今后生产水蛭素应以水蛭口器为原料,这样可以提高提取效率,节约劳动力,降低成本。

1 2
仅供学习研究参考:水蛭素研究网 » 传统提取天然水蛭素方法
分享到: 更多 (0)

评论 抢沙发

  • 昵称 (必填)
  • 邮箱 (必填)
  • 网址

中国水蛭素学习研究第一平台