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天然水蛭素活体多次提取方法

笔者在提取天然水蛭素的过程中,发明了一种吸血类水蛭活体多次提取天然水蛭素的方法,并获得了授权国家发明专利,简述如下。

1.技术原理

对吸血类水蛭活体投喂特异性诱导液(又称饵料),使其分泌天然水蛭素混于诱导液中存于体内,然后采用物理方法如人工挤压或催吐的方法将其体内的唾液(包括诱导液)即天然水蛭素粗品吐出来,接着以这些天然水蛭素粗品为原料按常规的生化分离方法进行分离纯化制得天然水蛭素产品;同时对已提取天然水蛭素粗品后的吸血类水蛭继续按常规的方法进行养殖管理(在提取天然水蛭素粗品期间不投料),以备供下一次提取天然水蛭素粗品用,每间隔11一60天提取天然水蛭素粗品一次,每条吸血类水蛭可反复提取3一5次。为充分利用原材料,将其价值发挥到最大化当经过多次提取后的吸血类水蛭其唾液分泌量减少,同时天然水蛭素的含量也在逐步降低,因此在提取一定次数之后将吸血类水蛭处死、匀浆再进行最后一次提取天然水蛭素,这样就可发挥它身体的重要药用价值。

2.特异性诱导液的选择原则

(l)对吸血类水蛭必须有强烈的诱导性,能显著刺激其摄食,以最大限度地分泌出天然水蛭素

(2)无毒、无害、无刺激性,以确保产品的安全性。不影响天然水蛭素的分离纯化,以提高其提取率。

(3)必须添加有抑菌消炎和增强机体体质的物质,以提高吸血类水蛭的成活率。

 

3.提取要求与准备

(1)对吸血类水蛭活体要求:供提取天然水蛭素用的吸血类水蛭活体必须是健康无病,并进入性成熟阶段的个体,如菲牛蛭必须在4g以上,同时应饥饿30天以上。

(2)配制特异性诱导液。

(3)选择肠管:最好是选用猪小肠(又称十二指肠)或其肠衣、人工肠衣。在使用前应充分去除猪小肠内的内容物,或剥取小肠衣;人工肠衣则用温水浸泡3一5分钟后取出,备用。

(4)提取时的气温应在25℃以上。

4.提取方法

(1)灌肠:将制备好的特异性诱导液灌入上述准备好的肠管内,灌满后用线扎紧肠管两端使其膨胀,每段肠管长为20~60cm,接着,将这些肠管分散平放在容器中,肠管的重量(含特异性诱导液)必须是吸血类水蛭重量的3一8倍;然后将吸血类水蛭投放在含有特异性诱导液肠管的容器里,让吸血类水蛭自由吸吮,在60分钟内吸饱,吸饱特异性诱导液后的吸血类水蛭其体重增加2一6倍,取出这些吸血类水蛭,采用物理方法或催吐的方法使其体内的唾液(包括诱导液)即天然水蛭素粗品吐出来。

(2)催吐:将上述吸饱特异性诱导液后的吸血类水蛭活体置于容器中,加入一定量的催吐剂,使其吐出体内的唾液即天然水蛭素粗品液体,然后取出吸血类水蛭活体,并将其冲洗干净忌迷续饲养,以备下一次提取天然水蛭素粗品用;同时收集容器内的天然水蛭素粗品液体。

此法适用于规模化提取天然水蛭素粗品。

5.干燥
对上述天然水蛭素粗品液体经过滤、除杂,加入适量辅料混合后再进行干燥所得到的粉末成品,即为天然水蛭素粗制品,这些粗制品可作为中成药的原料。

6.分离纯化
同时,可对上述天然水蛭素粗品液体进行分离纯化,制得纯度较高的天然水蛭素产品,这些产品可作为制药的原料。分离纯化的方法可采用离心、酸沉、离子交换、凝胶过滤和高效液相色谱法或超滤、水提醇沉、离子交换、反相层析法等。

7.吸血类水蛭活体多次提取天然水蛭素方法的优点

采用诱导方法对吸血类水蛭活体进行多次提取天然水蛭素的方法,避免了传统方法对水蛭的一次性提取,能有效地提高原材料的利用率,且工艺简单,减少了杂质(如组织碎片、组织液、动物血液等),它彻底解决了目前国内外天然水蛭素生产中悬而未决的提取率低、工艺复杂等关键性难题,明显降低了生产成本,从而使天然水蛭素的规模化生产变为现实。同时保护了水蛭的野生资源,又带动了水蛭养殖业的发展。

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