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水蛭素抗凝、抗血栓、抑制血小板聚集作用

动脉和静脉血栓是导致许多疾病的主要因素,动脉血栓通常导致严重的心肌梗死、中风、肢体坏疽,而静脉血栓则通常导致肚体栓塞和肺栓塞。诱导血管内血栓形成的因素有很多种,但根本因素是血液凝固、血小板站附和聚集。静脉血栓形成主要由于血液凝固,动脉血栓形成则主要由于血小板黏附。血小板聚集性过高是促使心血管疾病发展的重要因素。凝血酶在凝血过程中起着至关重要的作用,即纤维蛋白原变成纤维蛋白,最终使凝块形成。凝血酶也是引起血小板聚集的最主要启动剂之一。由于凝血酶在血液凝固过程及血小板启动过程中具有双重作用,近年来凝血酶抑制剂如水蛭素特别受到重视。

水蛭素的抗凝作用强,临床适应证广泛,较之肝素及其他抗凝剂有其独特的优点。

1.黎渊弘等采用家兔动脉血栓和大白鼠静脉血栓模型,试验组按60AT一U/kg体重静脉注射菲牛蛭提取物(主要含水蛭素),对照组注射生理盐水。测定其对动脉及静脉血栓形成的作用。

结果:给药后,菲牛蛭提取物对动脉血栓、静脉血栓湿重和干重均有明显减轻作用,与生理盐水对照组比较,差异显著(p<0.05)。

结论:菲牛蛭提取物具有较强的抗动物血栓形成作用.

讨论:抑制血栓的形成一般有三条途径:一是促进纤溶系统对纤维蛋白原或纤维蛋白的降解;二是抑制凝血功能;三是抑制血,J板的聚集、站附、释放功能。体内外试验表明:水蛭素是迄今发现的作用最强的凝血配时印制剂,对各种血栓性疾病都有效。水蛭素作用机制是它与凝血酶按1:1比例非共结合形成一种稳定的复合物,抑制了凝血酶的活性,阻止纤维蛋白原及凝血酶对血小板的作用,达到抗凝目的。水蛭素在常温干燥状态下比较稳定,其作用不依赖于抗凝血酶Ⅲ,其抑制血栓形成的浓度远小于其引起出血的浓度,无明显毒副作用。动物性试验和临床研究证明,无论急性、亚急性的毒性试验,对血压、心率、血常规、出血时间和血液化学成分均不产生影响,呼吸系统也没有影响,无过敏反应,一般无特异抗体发现。水蛭素半数致死量LD50>50mg/kg,远大于治疗所用剂量(lmg/kg)。这些特性显示了菲牛蛭提取物作为一种强力抗血栓制剂的潜在价值。

2.范亚明等通过对实验组家兔耳静脉注射水蛭素230AT一U/kg体重,对照组的家兔耳静脉注射等量的生理盐水0.2ml以kg体重进行体内试验,于注射后1、2、4、6、24小时从对侧耳静脉采血,用常规临床检验方法以测定凝血酶原时间和凝血酶凝结时间,以及凝血第IV因子时间,分别与试验前的各项检测指标进行比较;同时用两只正常家兔,取血加水蛭素后做体外实验,检测指标同上。并用水蛭素进行体外抗血栓试验,以观察水蛭素的抗血栓作用。

结果:
(1)体内试验:水蛭素对凝血酶原时间和凝血酶凝结时间有非常显著的影响,在静脉注射水蛭素后1小时作用效果达到高峰,凝血酶原时间和凝血酶凝结时间显著延长(p<0.01),2小时后逐渐恢复,24小时后基本恢复到注射水蛭素前的水平。水蛭素对凝血第Ⅶ因子影响不显著。

(2)体外试验:从家兔耳静脉采血2mL后,体外加水蛭素0.2~O.4AT-U,测定凝血酶原时间和凝血酶凝结时间。结果两者的时间随浓度增加而延长,成正比关系。说明水蛭素具有抑制凝血酶的作用。

(3)抗血栓作用:给家兔注射水蛭素后1小时,血小板开始聚集的时间延长,形成的血栓长度缩短(p<0.05),血栓重量减轻(p<0.05),说明水蛭素具有抗血栓形成的作用。

3.成小蔓等将24只Bceogle犬,随机分为水蛭素大、中、小剂量组,剂量分别为(60OAT-U/kg,30OAT-U/kg,15OAT-U/kg)和空白对照组,每组6只。各试验组动物均经口给药,分别于给药前、达稳态前和达稳态后取血1-4mL,测定凝血时间(CT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶凝固时间(TT)、纤维蛋白原(FBG)、活化部分凝血活酶时间(APTT);同时采用下腔静脉结扎法制作血栓模型,计算深静脉血栓形成百分率和血栓重量。

结果:各用药组CT、PT、TT、APTT值与空白照组均有差异或显著差异(p<0.05或p<0.01),给药对FBG没有明显影响;深静脉血栓形成百分率和血栓重量也有差异或显著差异。

结论:口服重组水蛭素具有很强的特异性凝酶抑制作用,同时具有抗凝、抗血栓作用,可用于防治实验性深静脉血栓形成。

4.刘煌等采用大鼠下腔静脉血栓模型和大鼠体外AV循环模型进行重组水蛭素Ⅲ的抗凝及抗血栓作用研究,结果显示,重组水蛭素Ⅲ25μg、5μg每公斤体重都能显著减少静脉血栓湿重,与肝素钠(10OU/kg体重)作用相似,与对照组比较差异明显(p<0.05),说明重组水蛭素和肝素都具有抗静脉血栓作用,但水蛭素所需剂量比肝素低得多,说明重组水蛭素Ⅲ用于防止体外循环血栓形成有效,另外,重组水蛭素对动脉血栓、弥漫性血管内凝血及血栓再栓塞均有作用。

重组水蛭素与天然水蛭素的药理活性和作用基本相同,都是作用很强的凝血酶特异性抑制剂,具有抗凝、抗血栓等药理作用,可防治各种实验血栓形成,对多种具有高凝状态的疾病疗效良好,是一种很有前途的抗凝抗栓药物。

5.王维亭等采用犬冠状动脉内皮损伤与临界狭窄引起犬不稳定型心绞痛模型及大鼠颈动脉电刺激血栓形成模型30只,然后分成5组,每组6只,对照组给予等体积的生理盐水,受试药物组给予静脉注射重组水蛭素(r-HV2),3个剂量分别为0.6、2.0、6.0mg/kg,阳性药对照组给予肝素钠,剂量为2.0mg/kg,以观察其抗血栓和抗凝的效果。同时取雄性Wistar大鼠,体重200-250g,按体重随机分成5组,每组10只,分别为生理盐招寸照组,r-HV2 3个剂量组(剂量分别为0.3、1.0、3.0mg/kg),肝素钠阳性照组(剂量为3mg/kg)。在实验性体内血栓形成仪的刺激下,测定动脉血栓形成的时间。

结果:静脉;主射重组水蛭素0.6、2.0、6.0mg/kg,能抑制因狭窄及局部损伤犬冠状动脉引起的血小板依赖性血栓形成,表现在周期性冠状动脉流量降低发生次数呈剂量依赖性减少,分别减少了27.0%、43.6%、55.9%。重组水蛭素具有明显的抗凝作用,0.6、2.0、6.0mg/kg延长犬凝血酶时间(TT)、白陶土活化的部分凝血活酶时间(APTT)。重组水蛭素有引起一定程度的出血作用,麻醉犬伤口失血量及站膜出血时间较肝素钠组稍轻。重组水蛭素对麻醉犬血压及心率无明显影响。静脉给予重组水蛭素0.3、1.0、3.0mg/kg,呈剂量依赖性延长动脉血栓的形成时间,与对照组比较,分别延长了22.8%、55.0%、72.0%(均P<0.01)。

结论:重组水蛭素具有明显的抗血栓和抗凝作用,对不稳定型心绞痛具有明显的治疗作用。

讨论:动脉血栓的形成过程与不稳定型心绞痛等疾病的发病机制有密切的关系。凝血酶在血栓形成过程中起主要作用。r-HV2是特异性极强的直接凝血酶印制剂,它的抗凝作用与肝素不同,与凝血酶作用不需要辅因子,因此不仅抑制循环中的凝血酶,而且能抑制与血栓结合的凝血酶。水蛭素与凝血酶结合后可使凝血酶启动血板作用减弱,通过抑制凝血酶诱导的血小板启动,r-HV2具有明确的抑制血小板聚集的作用。

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